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病例讨论
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微柱凝胶技术在不规则抗体筛选中的应用研究
 
观察微柱凝胶法和凝聚胺法的抗体检出率,探讨微柱凝胶法的临床应用价值。
用微柱凝胶法与凝聚胺法同时筛检IgG类抗C、抗c、抗D、抗E和抗e五种标准抗血清,并比较结果;对3 020例输血前患者血浆用两法进行抗体筛选,阳性结果用谱细胞进行抗体鉴定,结果用统计学处理。
两法对IgG类五种标准抗血清的筛选结果(阳性、阴性)完全一致,但两法阳性凝集强度部分不同。微柱凝胶法抗体筛选阳性23例,凝聚胺法抗体筛选阳性17例。两法不规则抗体检出率差异无显著性(P>0.05)。
采用微柱凝胶法进行不规则抗体筛选,灵敏度高,特异性好,结果稳定可靠,可取代传统的凝聚胺法,用于临床常规检测。
抗体筛检可以发现有意义的不规则抗体,保证患者用血安全,避免因血型不合引起的输血反应。红细胞不规则抗体筛选的经典方法为抗人球蛋白法,但由于此方法操作复杂,技术要求高,因此在临床的开展曾一度受到限制;凝聚胺法由于操作简单方便,目前成为国内开展红细胞不规则抗体筛选的常用方法。近年来发展起来的微柱凝胶技术(MGT)是在经典的抗人球蛋白试验基础上发展起来的新型检测方法,微柱凝胶检测技术被广泛应用于血型鉴定、交叉配血及不规则抗体筛查。为了评价微柱凝胶技术在不规则抗体筛选中的临床应用效果,我们采用微柱凝胶法和凝聚胺法对IgG类抗C、抗c、抗D、抗E和抗e 五种标准抗血清及输血前、手术备血患者样本进行血型不规则抗体筛检,患者阳性样本进行抗体鉴定,结果如下。
对象2008年2月~2009年9月在本院住院输血前、手术备血患者3020例,其中男1 344例,女1 676例;年龄5天~87岁。
抗体筛选每个被检者占3个微柱,用定量加样器向每个柱内分别加入50μl 1%的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ号筛选细胞及25μl 被检血浆,然后在37℃专用孵育器内孵育15min,最后放入专用卡式离心机离心10min判定结果。离心后红细胞沉积在微柱底层者为阴性结果,滞留在凝胶上方或中间者为阳性结果。同种特异性抗体鉴定用10组谱细胞进行,操作步骤同抗体筛选,最后根据反应格局进行判断。
用微柱凝胶法与凝聚胺法同时对IgG类抗C、抗c、抗D、抗E和抗e五种标准抗血清进行抗体筛选,除阳性强度部分不同外,结果(阳性、阴性)完全一致,抗D标准抗血清与对应筛选红细胞在微柱凝胶卡中的凝集强度与凝聚胺法相同,抗C、抗c、抗E和抗e四种标准抗血清与对应筛选红细胞在微柱凝胶卡中的凝集强度较凝聚胺法强。
讨论
抗体筛查是输血前常规检查,其目的是保障输血安全。采用一种灵敏度高,特异性好,结果准确的检测方法对患者输血前或者供血者常规抗体筛选,借以发现有临床意义的不规则抗体,对临床安全输血具有重要的意义。由于有些抗体存在剂量效应关系,筛选细胞用纯合子细胞,传统的方法通常采用间接抗人球蛋白实验,费时费力,工作量大,达亚美微柱凝胶系统采用凝胶过滤技术和离心技术及抗原抗体反应,凝集的红细胞不能通过凝胶间隙而留在凝胶的上层呈阳性反应,而未凝集的红细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管的底部呈阴性反应。由输血产生的免疫性抗体,以Rh抗体为最多,各抗体频率的多少主要取决于抗原的免疫原性及其在人群中的分布频率。一般说,抗原的免疫原性越大,产生抗体的机会越多。不规则抗体在正常人群中检出率为0.3%~2%,本研究微柱凝胶法检出的血型不规则抗体23例,阳性率为0.76%,以Rh抗体为最多。微柱凝胶法与凝聚胺法比:①微柱凝胶法比凝聚胺法检测受血者免疫性不规则抗体灵敏度高, 结果更准确。对抗体含量低的弱抗体,往往凝聚胺试验阴性时,微柱凝胶法仍可检出。其灵敏度较凝聚胺法高1~5个滴度,比传统试管法要高出2~7个滴度。对抗体含量低的弱抗体,往往凝聚胺试验阴性时,微柱凝胶法仍可检出。本研究结果表明,微柱凝胶免疫检测法检出23例红细胞不规则抗体,而凝聚胺法仅检出17例,微柱凝胶法单独筛选出抗-Fya、抗JKa和抗JKb 各1例。凝聚胺试验法漏检的6例经抗体鉴定均具有临床意义。②标准抗血清与对应筛选红细胞在微柱凝胶卡中的凝集强度较凝聚胺法强,本研究结果与郭博等检测结果一致。③结果稳定可靠容易判断,标本用量少、易标准化,适用于临床常规不规则抗体筛检。④微凝胶免疫检测法结果稳定,重复性好,技术容易掌握,尤其是不同人员的操作结果一致,避免人为因素的影响。⑤该实验孵育、离心时间较长,而且价格较贵(是凝聚胺试验的5倍)也是推广应用较慢的原因。对ABO血型的误判,也不能通过抗体筛查纠正查出。因此即使不规则抗体筛查阴性,还必须用能快速检测出不完全抗体的方法交叉配血,以确保输血万无一失。采用微柱凝胶技术检测不规则抗体,灵敏度高,结果准确可靠,可以有效预防ABO以外抗体引起溶血性输血反应的发生。MGT技术可以常规用于受血者不规则抗体筛查,值得临床推广运用。
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